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各类化学成分分析

  1122 其它类型因素理会33 生物碱是生物界除生物体必要的含氮化合物(如氨基酸、卵白质和B族维生素等)之 表的整个含氮有机化合物,因其机闭中氮 原子上的未共享电子对而民多拥有碱性。 含生物碱因素的常用中药:山豆根、造川乌、马钱子、延胡索、苦参、麻黄、黄连、 黄柏、防己等 CHCH OHNHCH Ephedrinehydrochlorede 麻黄碱 HO OCH COOH Aconitine乌头碱 水苏碱66 77液体状的生物碱及部分幼分子生物碱有挥发 性以至升华性 如:麻黄碱拥有挥发性 咖啡因拥有升华性 生物碱日常无色,但有长共轭机闭,并有帮色团的,可显差异色彩。如:幼檗碱黄色 88 大大都生物碱难溶于水,易溶于氯仿、、乙醇、丙酮及苯等有机溶剂 与酸联合成盐生水溶性增补,但酸差异,天生的盐水溶性有分别 季胺型生物碱、有氮氧配位键的生物碱易溶于水。 99 液体生物碱及少许幼分子固体生物碱则既溶于水也可溶于有机溶剂 含有酸性官能团或酯键的生物碱还可溶于少许碱液或热苛性碱液 10 10 大大都生物碱正在酸性水溶液可与某些试剂天生不溶于水的复盐或分子复合物。 酸性aq:KI-I KI(橘红~黄);HgI 中药水浸液中卵白质、多肽和鞣质等因素,也可与生物碱重淀试剂天生重淀,需解除作梗,提防闪现假阳性结果。 季铵盐 1111 生物碱正在肯定pH条款下与少许酸性染料(多为磺酸肽类)天生有色配合物,可 被氯仿等有机溶剂定量提出。 机闭中拥有酯键的酯碱,如:乌头碱可与异羟肟酸铁试剂响应出现紫血色 12 12 pH13 13 重淀法 薄层色谱法 气相色谱法 高效液相色谱法 凡是理化鉴识 色谱鉴识 14 14 张开剂:多用氯仿、苯等低极性溶剂,出席其它溶剂调度张开剂的极性。(因为硅胶显弱酸性,强碱 性的生物碱正在硅胶板上能变成盐,使R 值很幼或拖尾,变成复斑。正在硅胶吸附薄层中,常用碱性体例 或正在碱性境遇下张开。) 显色剂:改进碘化铋钾试剂,有时喷碘化铋钾试剂后再喷硝酸钠试剂,可使样品黑点更明确;亦可用 碘蒸气、硫酸铈、碘铂酸等。 15 15 例:三妙丸中黄柏及幼檗碱的鉴识 (苍术、黄柏、牛膝) 取三妙丸粉末0.1g,加10ml,超声惩罚15分钟,滤过,弃 去液,残渣加甲醇5ml,超声惩罚15分钟,滤过,滤液浓 缩至1ml,动作供试品溶液。另取黄柏比较药材0.1g,同造成 比较药材溶液。再取盐酸幼檗碱比较品,加甲醇造成每1ml含 0.5mg的溶液,动作比较品溶液。吸收供试品溶液2ml、比较 药材溶液与比较品溶液各1ml,不同点于统一硅胶G薄层板上, 以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试剂(126331)为展 开剂,置氨蒸气预饱和的张开缸内,张开,取出,晾干,置紫 表灯(365nm)检视,供试品色谱中,正在与比较药材色谱相应的 名望上,显好像的黄色荧光黑点;正在与比较品色谱相应的名望 上,显好像的一个黄色荧光黑点。 16 16 首要是以水为固定相的正相纸色谱法,散开恶果常取决于滚动相的性子。BAW体例 显色剂:根基和薄层色谱法好像,但含硫酸的试剂不实用。 17 17 条款差异时,可已知品作内标,采用峰面积或峰高加 甜头:神速,机敏、微量等18 18 生物碱的含量测定法子早期常用酸碱滴定法、重淀滴定法等经典的化学法子,近年 来多采用分光光度法、薄层色谱法及高效 液相色谱法等 (二)生物碱类单体因素的含量测定19 19 直接测定法 重量理会法 酸碱滴定法 离子对萃取比色法 酸染料比色法 苦味酸盐比色法 雷氏盐比色法 异羟肟酸铁比色法 本法实用于处方药味较少、 内因素较简陋的中药造剂 20 20 强碱滴定生物碱盐时,正在70%~90%的乙 醇介质中止境比正在水中显著,所以常将生 物碱盐溶于70 %~90%乙醇,再用模范碱 -乙醇液滴定。 若采取的溶剂及指示止境法子符合,也可 用非水滴定法实行。 返滴定法 21 21 指示止境法子 电位法 指示剂 水溶液中 非水溶液 溴酚蓝 甲基红 溴甲酚蓝 酚酞 溴酚蓝 甲基黄 结晶紫 净化-中性氧化铝;空缺试验 22 22 处方麻黄洋金花 苦杏仁 连翘 法子 精细量取止喘灵打针液10ml,置分液漏斗中,加 1mol/L氢氧化钠溶液0.5ml,玩快三投注平台技巧用三氯甲烷提取4次, (10ml、10ml、5ml、5ml)团结三氯甲烷液,置具塞锥 形瓶中,精细加硫酸滴定液(0.01mol/L)10ml及新沸过 的冷水10ml,满盈振摇,加茜素黄酸钠指示剂1-2滴,用 氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)滴定至淡血色,并将滴定 结果用空缺试验校正。每1ml硫酸滴定液相当于3.305mg 的麻黄碱(C 10 变色界限:3.7~5.2黄紫 23 23 重量理会法 提取重量法 重淀法 实用:搀杂碱、未知机闭、M分别大 甜头:轻易、不必换算因数无需知M 短处:挥发性、碱性条款下可水解生物 碱不实用;取样大、操作易乳化、费时 甜头:取样少、机敏度高 短处:筹划丰富、操作繁琐 24 24 处方昆明山海棠取昆明山海棠片60片,除去糖衣,研细,取 约相当于25片的量,精细称定,置200ml锥形瓶中,加适量硅藻 土(每1g中出席硅藻0.2g),混匀,加乙醇70ml,加热回流 40分钟,放冷,滤过,滤渣再加乙醇50ml,加热回流30分钟, 放冷,滤过,团结滤液,置水浴上蒸干,残渣加盐酸溶液 (1100)30ml,置水浴上搅拌使融解,放冷,滤过,残渣再 用盐酸溶液(1200)同法提取3次(20ml、15ml、15ml), 团结滤液溶于分液漏斗中,加氨试剂使溶液呈碱性,用振摇 提取4次(40ml、30ml、25ml、25ml),团结液,用水振 摇洗涤2次,每次10ml,液滤过,滤液置已正在100干燥至 恒重的蒸发皿中,正在低温水浴上蒸去,残渣中出席少许无水 乙醇,蒸干,正在100干燥至恒重,称定重量,筹划,即得。 25 25 不原委化学响应,行使生物碱物质自己的光招揽直接实行比色测定的法子。 凡是用于药味较少,作梗不大的中药造剂中总生物碱的含量测定。 2626 27 27 22 凭据生物碱的通性与酸性染料、雷氏盐、苦味酸盐等联合成有色化合物,并能溶于 有机溶剂中的 28 28 运用本法的闭节正在于介质的pH、酸性染料的品种和有机溶剂的采取。 常用的酸性燃料:甲基橙溴香草酚蓝(BTB) 溴甲酚绿等 29 29 有机相HIn 3030 pH的采取:凭据染料的性子及生物碱的碱性(pK 常用的酸性染料:甲基橙、溴香草酚蓝(BTB)、溴甲酚绿等 有机溶剂的采取规定:凭据离子对与有机相能否变成氢键以及变成氢键才能的强弱,氯仿等是常用的 提取溶剂。 正在提取进程中,苛防水分混入有机溶剂。31 31 法子比较品溶液造备 精细称取经105 C干燥至恒重的乌头碱比较品10mg,至100ml量瓶 中,加三氯甲烷融解并稀释至刻度,摇匀, 即得(每1ml中含乌头碱0.1mg)。 32 32 模范弧线的造备 精细量取比较品溶液0 ml、1 ml、2 ml、3ml、4 ml、5 ml,不同置于分液漏斗中,按次精 密出席三氯甲烷20ml,再精细出席pH3.0醋酸盐缓冲液 (称取无水醋酸钠0.15g,加水使融解,加冰醋酸5.6ml, 用水稀释至500ml,摇匀,并正在pH计上校正)10ml和 0.1%溴甲酚绿(取溴甲酚绿0.2g加0.05mol/L氢氧化钠 溶液3.2ml使融解,用水稀释至200ml,摇匀)2 ml,强 力振摇5分钟,静置20分钟,分取三氯甲烷液,用干燥 滤纸滤过,以相应考剂为空缺,滤液照分光光度法,分 别正在412nm的波甜头测定招揽度。以招揽度为纵坐标, 浓度为横坐标,绘造模范弧线 测定法 取装量分别项下的实质物,研细,取1g,精 密称定,置具塞锥形瓶中,精细出席-三氯甲烷- 无水乙醇(1681)的搀杂溶液25ml 和氨试液 1.5ml,摇匀,称定重量,于神速混匀器上振荡三次, 每次2分钟,安放歇宿,称定重量,用上述搀杂溶液补 足减失的重量,再于神速混匀器上振荡2分钟,静置, 倾取上清液,精细量取5.0ml,置分液漏斗中,加 5ml,用0.05mol/L的硫酸溶液提取4次,每次10ml, 分取硫酸液,滤过,团结滤液,置另一分液漏斗中, 34 34 加浓氨试剂4ml,摇匀,用三氯甲烷提取4次,每次 10ml,分取三氯甲烷层,滤过,团结滤液,蒸干,残 渣于105加热1幼时,取出,放冷,加三氯甲烷分次 融解,转化至25ml量瓶中,加三氯甲烷至刻度,摇匀, 精细量取20ml,置分液漏斗中,照模范弧线造备项下 的法子,自“精细出席pH3.0醋酸盐缓冲液10.00ml” 起,依法测定招揽度,从模范弧线上读出供试品溶液 中乌头碱的量(μg/ml)筹划,即得。 35 35 该法为酸性染料分光光度法,其水相pH的采取 是离子对萃取法赢得得胜与否的闭节,风湿骨痛 胶囊测按时的pH是不同取乌头碱模范液以pH2.5、 3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、5.8、6.0、6.2的 缓冲液实行试验结果,评释以pH3.0较为适宜, 正在该条款下测定供试液招揽度较大,指示液空缺 试验招揽度较幼,且呈色褂讪性较好。 36 36 正在弱酸性或中性溶液中生物碱可与苦味酸定量天生苦味酸盐重淀,该重淀可溶于氯仿等 有机溶剂,也可能正在碱性条款下解脱离释出 生物碱和苦味酸。 37 37 雷氏盐正在酸性介质中可与生物碱类因素定量地天生难溶于水的有色合物。 将重淀过滤洗净后溶于丙酮(或甲醇),直接比色法测定,换算成生物碱含量。 也可精细出席过量的雷氏盐试剂,滤除天生的生物碱雷氏盐重淀,将滤液正在520~526nm(溶于甲醇 时,其λmax为427nm)处实行比色,测定残余的 过量的雷氏盐含量,间接筹划生物碱的含量。 38 38 硫氰化铬铵正在丙酮中的摩尔招揽系数ε=106.5 (单盐),故可凭据其招揽值A按下式直接测定而不 需绘造模范弧线。 W一被测物重量(mg)M一被测物质的分子量 V一融解重淀所用丙酮的ml数 39 39 雷氏盐的水溶液正在室温可了解,故用时应崭新配造,重淀也需正在低温实行 供试品如为稀的水溶液(如打针剂等),重淀 前应浓缩,对待中药造剂含有作梗物质时,应事 先原委纯化惩罚 雷氏盐的丙酮或丙酮一水溶液的招揽值,随时 间而有转化,故应尽速地测定。 40 40 处方 益母草 当归 人参 黄芪 何首乌 桃仁 蒲黄 熟地黄 昆布白术 黑木耳 比较品溶液造备 取盐酸水苏碱比较品适量,精细称定,加 0.1mol/L盐酸溶液造成每1ml含1mg的溶液,即得。 供试品溶液的造备 取装量分别下的实质物,研细,取12g,精 密称定,置具塞锥形瓶中,精细出席乙醇50ml,超声惩罚30分钟, 滤过,精细量取续滤液25ml,置50ml烧杯中,置水浴上蒸干, 精细出席0.1mol/L盐酸溶液10ml使融解,即得。 产妇康颗粒中益母草总生物碱的含量测定—雷氏盐比色法 41 41 测定法 取上述比较品溶液和供试品溶液,各加活性炭0.5g,置 水浴上出席1分钟,搅拌,滤过,滤液不同置25ml量瓶中,用 0.1mol/L盐酸溶液10ml分次洗涤烧杯和滤器,洗涤液并入统一 量瓶中;另取0.1mol/L盐酸溶液20ml置另一25ml量瓶中,动作 空缺溶液。各精细加新造的2%硫氰酸铬铵溶液3ml,摇匀,加 0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,置冰浴中安放1幼时,用 干燥滤纸滤过,取续滤液,以0.1mol/L盐酸溶液为空缺,正在 525nm的波甜头不同测定招揽度,用空缺溶液的招揽度不同减 去比较品与供试品的招揽度,筹划,即得。 42 42 含有酯键机闭的生物碱,正在碱性介质中加热,酯键水解,出现的羧基与羟胺响应天生异羟肟酸, 再与Fe 天生紫血色的配合物(异羟肟酸铁),正在肯定浓度下切合Beer定律,可用比色法实行含 量测定。 43 43 4444 吸附剂、张开剂及显色法子与鉴识类似,但哀求比鉴识庄重。 提防:运用改进碘化铋钾等动作显色剂时,必需齐备挥干张开剂后(加倍正在碱性境遇下张开时)才可喷洒, 不然配景深,反差幼,影响测定。 45 45 例九散漫中士的宁因素的含量测定—薄层扫描法 处方 马钱子粉 麻黄 乳香(造) 没药(造) 取本品约2g,精细称定,置具塞锥形瓶中,精细加三氯甲烷20ml 与浓氨试液1ml,轻轻摇匀,称重,于室温安放24幼时,再称重, 补足三氯甲烷减失的重量,满盈振摇,滤过。精细量取续滤液 10ml,用硫酸溶液(3100)分次提取,至生物碱提尽,团结硫 酸液,置另一分液漏斗中,加浓氨试液使呈碱性,用三氯甲烷分 次提取,团结液,蒸干,放冷,残渣中精细加三氯甲烷5ml使溶 解,动作供试品溶液。另取士的宁比较品,加三氯甲烷造成每 1ml含0.4mg的溶液,动作比较品溶液。吸收上述两种溶液各5μl, 不同点于统一硅胶GF 254 薄层板上,以甲苯一丙酮一乙醇一浓氨试 液(161214)的上层溶液为张开剂,张开,取出,晾干。 照薄层色谱法实行扫描,波长:λ =325nm,丈量供试品招揽度积分值与比较品招揽度积分值,筹划,即得。 46 46 22 正在反相高效液相色谱中,因为硅胶表貌残留硅羟基的影响,使生物碱理会易出现保存时刻延迟、峰形 变宽、拖尾;可采纳订正滚动相、固定相称设施以 驯服游离硅羟基的影响,知足定量理会的哀求。 中药造剂中生物碱因素实行高效液相色谱法测按时,运用较多的是紫表检测器。 47 47 处方麻黄、苦杏仁、石膏、甘草等色谱条款与体例实用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为 填充剂;乙腈-0.1%磷酸溶液(含0.1%三乙胺)(397)为 滚动相;检测波长为205nm。表面板数按盐酸麻黄碱峰计 算应不低于4000。 比较品溶液的造备 取盐酸麻黄碱比较品适量,精细称定, 加0.1mol/L盐酸溶液造成每1ml含45g 的溶液,即得。 48 48 供试品溶液的造备 精细量取本品5ml,加水10ml及浓氨 水0.5ml用提取5次(30ml,30ml,20ml,20ml, 20ml),团结液,加盐酸乙醇溶液(120)2 ml, 混匀,低温接受溶剂至干,残渣加乙醇5 ml使融解,转 移至25ml量瓶中,加0.1mol/L盐酸溶液至刻度,摇匀, 测定法不同精细吸收比较品溶液与供试品溶液各10l, 注入液相色谱仪,测定,即得。 49 49 33 生物碱盐正在急速加热进程中出现的酸对色谱柱和检测器晦气,该当提防。 造备供试品溶液时凡是采用冷提取,净化进程也要避免加热,以提防因素流失,末了需用氯仿等 低极性有机溶剂为溶剂造备成供试液。 50 50 5151 黄酮类化合物是指根基母核为2-苯基色原酮类化合物。 现泛指两苯环通过中间三碳键互相结合而成的一系列化合物。 正在植物体内大片面与糖联合成苷,一片面以游离大局存正在。 OHOH OH OHHO Quercetin OHIsorhamnetin OHOH OH OH Epictechin表儿茶素 OH OH HOOH OH OH HOOH Hyperoside 金丝桃苷 53 53 5454 黄酮类化合物的融解度因机闭及存正在形态(苷或苷元,单糖苷、双糖或三糖苷)差异而有很大分别。 游离苷元难溶或不溶于水,易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、等有机溶剂及稀碱液中。 5555 酸性:黄酮类化合物因分子中多有羟基,故显酸性,可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。 碱性:氧原子的性子:黄酮类化合物分子中γ-吡喃酮环上的1-位氧原子,因有未共用的电子对,故阐扬出单薄 的碱性,可与强无机酸,如浓硫酸、盐酸等天生盐,常 阐扬出异常的色彩,可用于鉴识。 天生的盐极不褂讪,加水后即可了解。56 56 黄酮类化合物的色彩响应多与分子中的酚羟基及γ-吡喃酮环相闭。 2与金属盐类试剂的络合响应57 57 反当令大都黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红-紫血色,少数显紫-蓝色,且B环上 有-OH或-OCH 花青素及片面橙酮,查耳酮等正在纯洁浓盐酸下也会发作色变,须预先作一比较,以便解除。 58 58 22 黄酮类化合物分子中有游离的3-OH、5-OH或邻二酚羟基时可与Al 等变成配合物,这些配合物有的出现荧光或色彩加深(如Al ),有的出现重淀(如Pb ;黄色(λmax =415nm),有荧光 的甲醇溶液;枸椽酸,5-OH黄酮的黄 色aq明显褪色;3-OH黄酮的aq呈鲜黄色 59 59 因有2-苯基色原酮的根基机闭,拥有特定的紫表招揽峰,两个较强的招揽带: 带正在240~285nm界限内,由A环上的苯甲酰基惹起。 黄酮类化合物当出席少许移位剂如甲醇钠、醋酸钠、氯化铝等,可使最大招揽波长发作位移。采取性提 高,可排除杂质的作梗,有利于含量测定。 60 60 6161 黄酮类化合物的色彩响应多与分子中的酚羟基及γ-吡喃酮环相闭。 2与金属盐类试剂的络合响应62 62 法子为将甲醇或乙醇提取液5~10ml,出席几滴浓 盐酸,然后出席少许镁(或锌)粉(须要时微热), 倘使有黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇存正在, 数分钟后即可闪现橙色~血色。 此响应要先加盐酸再加镁粉,由于像花色素等因素 正在纯洁加盐酸后就能出现色彩转化;为避免正在该反 应中供试品液自身色彩的作梗,可提防考查上升的 泡沫(阳性) 63 63 例牛黄解毒片(黄芩)的鉴识: 取本品6片,研细,加乙醇10ml,温热10分钟, 滤过,取滤液5ml,加盐酸0.5ml与少量镁粉,加 热,溶液显血色。 64 64 例银黄打针液的鉴识:取本品1ml于试管中,加5%亚硝酸钠溶液、 10%硝酸铝溶液各0.3ml,溶液呈黄色;另取 打针液0.1ml,加水10ml,摇匀,取稀释液 2ml,加5%二氯氧锆溶液1-2滴,溶液呈黄色, 再加盐酸1-2滴,色彩不褪。 65 65 显色:采用正在紫表光下考查荧光和喷显色剂相配合的法子。 66 66 处方陈皮 半夏(造) 茯苓 甘草 取本品5g,加甲醇30ml,置水浴上加热回流30分钟,滤过,滤液 浓缩至约5ml,动作供试品溶液。另取橙皮苷比较品,加甲醇造成 饱和溶液,动作比较品溶液。吸收上述两种溶液各2l,不同点于 统一用0.5%氢氧化钠溶液造备的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-甲 酸-水(1001713)为张开剂,张开,展距约3cm,取出,晾干, 再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(201011)的上层溶液为张开 剂,张开,展距约8cm,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,置紫表 光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,正在与比较品色谱相应的位 置上,显好像色彩的荧光黑点。 67 67 薄层板为氢氧化钠溶液造备的硅胶G板,可有用地 削减黄酮类因素正在硅胶板上的拖尾景色;实行二 次张开,可有用地增大极性黄酮类因素正在硅胶G板 上的散开度;三氯化铝显色后检视荧光,有用地 增大其检测的机敏度。 68 68 处方 金银花 黄芩 连翘 取本品1ml,加75%乙醇溶液5ml,摇匀,动作供试品溶液。 另取黄芩苷、绿原酸比较品,不同加75%乙醇造成每1ml含 0.1mg的溶液。吸收上述三种溶液各1~2l,不同点于统一聚 酰胺薄膜(5cm7cm)上,以醋酸为张开剂,张开,取出, 晾干,置紫表光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,正在与 比较品色谱相应的名望上,显好像色彩的荧光黑点。 69 69 7070 7171 11 黄酮类化合物拥有特定的紫表招揽峰,含黄酮类化合物的原料药及片面造剂经肯定 的提取纯化后,可直接于最大招揽波甜头 测定其招揽度,以芦丁等为比较品筹划其 含量。 72 72 灯盏细辛打针液中总咖啡酸酯的测定 处方 灯盏细辛提取物 比较品溶液的造备 取1,5-氧-二咖啡酰奎宁酸比较品适 量,精细称定,加0.1mol/L碳酸氢钠溶液造成每1ml含总咖 啡酸酯以1,5-氧-二咖啡酰奎宁酸10 mg的溶液,即得。 供试品溶液的造备 精细量取本品1ml,置200ml量瓶中, 加水至刻度,摇匀,即得。 测定法 不同取比较品溶液与供试品溶液,照紫表-可见 分光光度法,正在305nm波甜头测定吸光度,即得。 本品每1ml含总咖啡酸酯以1,5-氧-二咖啡酰奎宁酸计, 应为2.0~3.0mg。 73 73 22 黄酮类化合物显色自此显色物与配景最大招揽波长分别较大,可排除配景(即阴性 空缺)的作梗,以提升本法的采取性及灵 敏度。常用铝盐作显色试剂。 74 74 处方满山红 比较品溶液的造备精细称取正在120减压干燥至 恒重的芦丁比较品30mg,置100ml量瓶中,加 60%乙醇适量使融解并稀释至刻度,摇匀。精细量 取10ml,置50ml量瓶中,加60%乙醇至刻度,摇 匀,即得(每1ml含无水芦丁60g)。 75 75 模范弧线的造备 精细量取比较品溶液0.5ml 1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml与5.0ml,不同置10ml量瓶中,各加0.1mol/L三氯化铝溶液2ml、 1mol/L醋酸钾溶液3ml,加60%乙醇至刻度,摇 匀,安放30分钟;以相应的溶液为空缺。正在 420nm波甜头测定招揽度,以招揽度为纵坐标、 浓度为横坐标、绘造模范弧线 测定法 精细量取本品2ml,置50ml量瓶中,加60% 乙醇至刻度,摇匀,精细量取1ml,置10ml量瓶中, 照模范弧线的造备项下的法子,自“加0.1mol/L三 氯化铝溶液”起依法操作,精细量取本品2ml,置 50ml量瓶中,加60%乙醇稀释至刻度,精细量取 1ml,置10ml量瓶中,加60%乙醇至刻度,摇匀, 作空缺,依法测定招揽度,从模范弧线上读出供试 品溶液中芦丁的重量,筹划,即得。 77 77 7878 11 样品经有机溶剂或水提取后,可用硅胶、纤维素或聚酰胺实行层析,抵达散开目标。 层析后将含有待测组分的色斑刮下,用适宜溶剂洗脱,用紫表-可见分光光度法测定。 用薄层扫描仪(单波长或双波长法)可直接正在薄层板上扫描测定。 79 79 22 常用法:HPLC法,黄酮类因素正在紫表区有较强 的招揽,检测机敏度较高,故正在黄酮类单体因素 的定量理会中常用。 HPLC条款:正相和反相色谱两类,反相色谱运用较多。 反相色谱测定多用C18 键合相固定液,滚动相常用 甲醇-水-乙酸(或磷酸缓冲液)及乙腈-水。 检测器首要采用紫表检测器或荧光检测器。80 80 —HPLC 处方黄芪、党参、淫羊藿、野葛等。 色谱条款与体例实用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂;甲醇-水(2179)为滚动相;检测波长为 250nm。表面板数按葛根素峰筹划应不低于3000。 比较品溶液的造备 精细称取葛根素比较品11mg,置 10ml量瓶中,加甲醇融解并稀释至刻度,摇匀,精细 量取1ml,置25ml量瓶中,加30%甲醇稀释至刻度,摇 匀,即得(每1ml中含葛根素44g)。 81 81 供试品溶液的造备 精细量取本品5ml,置50ml量瓶 中,加丙酮稀释至刻度,摇匀,离心,精细吸收上 清液5ml,置50ml量瓶中,加30%甲醇稀释至刻度, 摇匀,即得。 测定法 不同精细吸收比较品溶液与供试品溶液各 10l,注入液相色谱仪,测定,即得。 82 82 8383 三萜是由30个碳原子构成的萜类化合物,大大都三萜化合物均可看作由6个异戊二烯 单元结合而成。 游离三萜类化合物与糖结成苷后,民多可溶于水,振摇后可天生胶体溶液,并有持 久性似胰子溶液的泡沫。故称为皂苷。 OHOH CH2OHOH OHOH OHOH OHOH CH3 CH3 CH3 3HCCH3 OH OH HO OHOH lyxAc Ac glcOH astragalus saponin OHOH OH OH OH OH H3CCOOH CH COOHHO OH HOOC HO OH OH Glycyrrhizic 85 85 可溶于水,易溶于热水、含水稀醇、热甲醇和热乙醇中,险些不溶于或难溶于、苯等极性幼的有 机溶剂。 正在含水丁醇或戊醇中融解度较好,且又能与水分成二相,可行使此性子从水溶液顶用正丁醇或戊醇提 取皂苷,借以与亲水性的糖、卵白质等散开。 三萜皂苷元能溶于石油醚、苯、、氯仿等有机溶剂,而不溶于水。 86 86 酸性皂苷aq,出席硫酸铵、醋酸铝or其他中性盐类即。 中性皂苷aq,则需出席碱式醋酸铅or 氢氧化钡等碱性盐类才 8787 正在无水条款下,三萜化合物可与强化酸(硫酸、磷酸、高氯酸) 、中强酸( 三氯乙酸) 、Lewis酸 (ZnCl 感化,会闪现呈色转化或呈荧光,出现一系列显色转化,放久后分子间互 相缩合而褪色。全饱和的、C 的化合物呈阴性,正本就有共轭双键的化合物显色很速,寂寞双键的显色较慢。 8888 醋酐-浓硫酸响应(Liebermann-Burchard响应):醋酐液,加浓硫酸-醋酐(120),黄-红-紫-蓝,末了褪色 五氯化锑响应(Kahlenberg响应):氯仿液or醇液,滴于滤纸,喷20%SbCl 冰醋酸-乙酰氯响应(Tschugaeff响应):冰醋酸液加乙酰氯数滴+氯化锌结晶数粒,,呈淡血色or紫血色 氯仿-浓硫酸响应(Salkowski响应):氯仿液,加浓硫酸,氯仿层 红or蓝,硫酸层有绿色荧光 8989 9090 鉴识时取样品肯定量,加水10ml,煮沸,滤过,将滤液于试管内激烈振摇,如出现长期性泡沫(15分钟以 上)即为阳性响应。所出现的泡沫多少与pH相闭,取 2支试管,一管出席0.1mol/L盐酸液5ml,另一管出席 0.1mol/L氢氧化钠液5ml,再各出席中药水溶液,使酸 管的pH为1,碱管的pH为13,激烈振摇,如两管的形 成的泡沫高度好像,则中药中含有三萜皂苷,如碱管 泡沫比酸管泡沫高数倍,则含有甾体皂苷。 91 91 鉴识时取片剂2片,研细,加水10ml,置水 浴上加热5分钟,滤过,滤液置具塞试管中, 密塞,强力振摇1分钟,即出现长期性蜂窝 状泡沫,正在15分钟内不得显著削减。 92 92 因为皂苷类因素民多无显著的紫表招揽,故经薄层色谱散开后选用恰当的显色剂显色考查,是皂苷定 性鉴识中最常用的法子。 显色剂:三氯醋酸、50%及10%硫酸乙醇液、三氯化锑、磷钼酸、碘蒸气等,此中以差异浓度的硫酸 乙醇液最为常用。 93 93 启脾丸中人参皂苷Re、人参皂苷Rg1的鉴识处方人参、白术、茯苓、甘草、陈皮、山药等 取本品9g,切碎,加硅藻土5g,研匀,加三氯甲烷40ml,超 声惩罚30分钟,滤过,药渣备用,挥干溶剂,加甲醇50ml,加 热回流1幼时,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇5ml使融解,将甲 醇液加正在中性氧化铝柱(100-200目,15g,内径10-15mm)上, 用40%甲醇150ml洗脱,搜罗洗脱液,蒸干,残渣加水30ml使溶 解,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次25ml,团结正丁醇液, 用正丁醇饱和的水洗涤3次,每次20ml,取正丁醇液,蒸干,残 渣加甲醇0.5ml使融解,动作供试品溶液。另取人参比较 94 94 启脾丸中人参皂苷Re、人参皂苷Rg1的鉴识药材1g,同法造成比较药材溶液。再取人参皂苷Re、人 参皂苷Rg1比较品,加甲醇造成每1ml各含1mg的搀杂溶液, 动作比较品溶液。吸收供试品溶液及比较药材溶液各1L、 比较品溶液5L,不同点于统一硅胶G薄层板上,以三氯甲 烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15402210)10以下安放后 的基层溶液为张开剂,张开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙 醇溶液,正在105加热至黑点显色明确,置紫表光灯 (365nm)下检视。供试品色谱中,不同正在与比较药材色谱 和比较品色谱相应名望上,显好像色彩的荧光黑点。 95 95 9696 提取溶剂:各样浓度的甲醇(70%~95%)、乙醇、异丙醇、丁醇、戊醇。 散开:大孔吸附树脂惩罚后溶剂洗脱得总皂苷类因素。 97 97 9898 正在中药造剂中,当处方中药味含皂苷类因素较多时,常用正丁醇作溶剂,测定正丁 醇浸出物。 99 99 处方甘草 取本品约6g,精细称定,加水50ml 融解后,移至 100ml量瓶中,用乙醇稀释至刻度,混匀,静置12幼时, 精细吸收上清液25ml置烧杯中,加氨试液3滴,置水浴 上蒸发至稠膏状,加水30ml使融解,徐徐出席盐酸溶 液(310)5ml,正在冰水中静置约30分钟,滤过 100 100 重淀用冰水洗涤4次,每次5ml,弃去洗液及滤液,重 淀正在滤纸上安放约2~3幼时,使水分天然挥散,再用预 先加热至60~70的乙醇10ml使重淀融解,滤过,滤 器用热乙醇洗涤至洗液无色,团结乙醇液,置已干燥至 恒重的烧杯中,正在水浴上蒸干,并正在105干燥3幼时, 精细称定,筹划供试品中甘草酸的含量,即得。 101 101 常用三萜皂苷显色剂有香草醛-硫酸、香草醛-高氯酸、醋酐硫酸、高氯酸、浓硫酸以及亚甲蓝等 用该法测定中药造剂中总皂苷(或总皂苷元)含量时,可选用单体皂苷(或皂苷元)作比较品,但要提防测 定单体皂苷(或皂苷元)与总皂苷的换算系数。 p.140 102 102 定量法子可采用薄层洗脱-比色法或薄层扫描法103 103 大大都三萜皂苷类因素,如人参皂苷、三七皂苷等可行使其正在紫表区的末尾招揽来检测,但机敏 度相对较低。 若中药造剂中所含三萜皂苷类因素自身拥有较强的紫表招揽,如甘草酸、远志皂苷等,可采用 HPLC法散开并用紫表检测器检测 蒸发光散射检测器(ELSD)用于高效液相色谱法检测三萜皂苷类因素的运用日渐遍及。 104 104 Rg1 Rb1 R1 HPLC-UV处方三七 色谱条款与体例符合性试验以十八烷基键合相硅胶 下表实行梯度洗脱;检测波长为203nm。表面板数按三七苷R1峰筹划不低于4000。 时刻(分钟) 滚动相A(%) 滚动相B(%) 0~12 19 81 12~60 1936 8164 105 105 比较品溶液的造备 取人参皂苷Rg1比较品、 人参皂苷Rb1比较品、三七皂苷R1比较品各 适量,精细称定,加甲醇造成每1ml含人参皂 苷Rg10.4mg、人参皂苷Rb10.4mg、三七皂 苷R10.1mg的搀杂溶液,即得。 106 106 供试品溶液的造备 取本品10片,精细称定,研细, 取约0.8g,精细称定,置具塞锥型瓶中,精细出席 甲醇50ml,称定重量,安放歇宿,置80水浴上 加热回流2幼时,放冷,再称定重量,用甲醇补足 减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。 测定法 不同精细吸收比较品溶液与供试品溶液各 10l ,注入液相色谱仪,测定,即得。 107 107 本品每片含三七以人参皂苷Rg1(C 42 人参皂苷Rb1(C54 23)和三七皂苷R1 18)的总量计,幼片不得少于10.0mg, 大片不得少于20.0mg。 108 108 HPLC-ELSD处方黄芪防风白术 色谱条款与体例符合性试验 以十八烷基键合相硅胶为 填充剂;以乙腈-水(3565)为滚动相;蒸发光散射 检测器。表面板数按黄芪甲苷峰筹划不低于3000。 比较品溶液的造备 取黄芪甲苷比较品,精细称定, 加甲醇造成每1ml含0.4mg的溶液,即得。 109 109 供试品溶液的造备 精细量取本品20 ml,用水饱和的 正丁醇振摇提取5次,每次25 ml,团结正丁醇提取液, 用氨试液洗涤3次,每次20 ml,正丁醇提取液接受至 干,残渣加甲醇融解并转化至10ml量瓶中,加甲醇至 刻度,摇匀,离心,取上清液,即得。 测定法 不同精细吸收比较品溶液5l、20l及供试品 溶液10l,注入液相色谱仪中,测定,用表标两点法 对数方程筹划,即得。 110 110 图1空缺样品HPLC图 图2黄芪甲苷比较品HPLC图 图3黄芪药材HPLC图 造剂HPLC图111 111 中药中醌类化合物首要有苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌四品种型。此中以蒽醌化合物最为多见,蕴涵蒽醌 和其差异还原水平的产品和二聚物。这些化合物可 游离存正在,也可与糖联合成苷,称为蒽苷。 OHOH OH Emodin 大黄素 OH OH Alkannin左旋紫草素 Tanshinone丹参酮IIA 113 113 苯醌及萘醌多以游离形态存正在;而蒽醌类则往往联合成苷存正在于植物体内。 联合成苷后极性增大,易溶于甲醇、乙醇中,正在热水中也可融解,险些不溶于苯、、氯仿等非极性溶剂中 114 114 蒽醌类化合物分子中多拥有酚羟基,故拥有肯定的酸性,正在碱性水溶液中易溶,加酸酸化时又可从新重淀析出 碱性条款下:羟基蒽醌正在碱性溶液中色彩调动并加深。多呈橙红、紫红及蓝色。 与金属离子:蒽醌中若有α-酚羟基or具邻二酚羟基,可与Pb 的配合物可正在肯定pH下与对亚硝基二甲基苯胺:9位10位未代替的羟基蒽醌,加倍1,8- 二羟基衍生物,酮基对位的亚甲基上的氢很灵活,可归纳 115115 1显色响应-行使碱性条款下的呈色响应或醋酸镁 显色防御等可对羟基蒽醌类因素实行鉴识 2升华法-游离的蒽醌及其他醌类衍生物多拥有升华性。可采用升华法取得升华物,正在可见光下观 察或加碱性试液显色定性 3TLC116 116 例天麻片中何首乌的鉴识取本品20片,除去包衣,研碎,加20ml, 振摇10分钟,安放20分钟,滤过,滤液呈黄色, 取滤液10ml,置分液漏斗中,加氢氧化钠试液 5ml,轻轻振摇,水层显血色,再加稀盐酸5ml, 使水层呈酸性,振摇后水层由血色变为无色。 117 117 显色法子:首要有喷碱性试剂或醋酸镁甲醇液、氨气熏下及正在紫表灯考查荧光,亦可正在可见光下直接考查色斑 118 118 处方大黄 牵牛子 槟榔 人参 朱砂 取本品1.5g,加甲醇25ml,浸渍1幼时,滤过,滤液 蒸干,残渣加水20ml使融解,再加盐酸2ml,置水浴上 加热30分钟,随即冷却,用振摇提取2次,每次 20ml,团结液,蒸干,残渣加乙酸乙酯1ml使融解, 119 119 动作供试品溶液。另取大黄比较药材0.1g,同法造成对 照药材溶液。吸收上述两种溶液各1-2l,不同点于统一 硅胶G薄层板上,以石油醚(30-60)-甲酸乙酯-甲酸 (1551)的上层溶液为张开剂,张开,取出,晾干, 置紫表光灯(365nm)下检视。供试品色谱中正在与比较 药材色谱相应的名望上,显好像的5个橙黄色荧光黑点; 置氨蒸气中熏后,日光下检视,黑点变为血色。 121 121 1总蒽醌类因素含量测定2蒽醌类单体因素的含量测定 122122 游离蒽醌的测定:含量凡是不高,且为脂溶性,故此片面多用弱极性溶剂如、氯仿灯提取后加碱比色测定 联合蒽醌的测定:日常是取游离蒽醌测定项下的药渣将苷提出,水解成苷元后测定;也可将药渣先行酸水解,然后 用非极性溶剂提取苷元后测定;或取待测样品先行酸水解, 然后用非极性溶剂提取苷元后测定,其结果为总蒽醌含量, 从中减去游离蒽醌含量,即得联合蒽醌的含量 123 123 处方石膏、大黄、黄芩、金银花等比较品溶液测定 以1,8-二羟基蒽醌为比较品,精细称取 10mg 于100ml 量瓶中,加甲醇融解并稀释至刻度 (100g/ml)。取1ml比较品液于10ml量瓶中,正在水浴 上蒸干,加5%氢氧化钠-2%氢氧化铵搀杂碱融解并稀释 至刻度,安放1幼时,以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵搀杂碱 液为空缺,正在510nm波甜头测定。 124 124 样品测定 游离蒽醌的测定:取牛黄解毒片10片,刮 去糖衣,精细称定重量,研细。称取一片重,置于具塞 锥形瓶中,精细出席三氯甲烷100ml,称重,水浴上回 流4幼时,取下,加塞,放冷,称重,用三氯甲烷增加 至原重量,滤过,吸收滤液50ml于分液漏斗中,用蒸 馏水20ml洗涤数次,至水层无色,弃去水液。三氯甲 烷层用5%氢氧化钠-2%氢氧化铵搀杂碱液振摇萃取数 次,直至搀杂碱液无色,团结碱液,用20ml 125 125 三氯甲烷洗涤数次,至三氯甲烷层无色,弃去三氯甲烷层。将 搀杂碱液正在水浴上加热数分钟至三氯甲烷挥尽,冷却,移入 100ml量瓶中,并稀释至刻度,安放1幼时,以5%氢氧化钠- 2%氢氧化铵搀杂碱液为空缺,正在510nm处测定。按下式筹划 游离蒽醌的含量(相当于1,8-二羟基蒽醌含量): 游离蒽醌含量%(w/w)= 每片含游离蒽醌量=均匀片重游离蒽醌含量(%)(w/w)